Ntụgharị anya na mmeghachi omume pcr

N'oge pcr mmeghachi omume, a na-ezute ụfọdụ ihe na-egbochi ihe.
N'ihi oke nghọta nke Pcr, a na-ewere ya dị ka otu n'ime ihe ndị kachasị mkpa na-emetụta nsonaazụ pcr na-arụpụta ihe ma nwee ike iwepụta nsonaazụ ụgha.
A na-akatọ ụzọ dị iche iche bụ isi dị iche iche na-eduga na nsonaazụ ụgha. Ọ bụrụ na otu ihe dị mkpa ma ọ bụ karịa ngwakọta nke pcr ngwakọta ma ọ bụ mmeghachi omume nke onwe ya na-egbochi ma ọ bụ gbochie ya, enwere ike igbochi ya. Nke a nwere ike iduga belata arụmọrụ yana nsonaazụ na-adịghị mma ụgha.
Na mgbakwunye na mgbochi, ọnwụ nke ebumnuche nucleic acid nwere ike ime n'ihi mbupụ na / ma ọ bụ ọnọdụ nchekwa tupu ịlele nkwadebe. Karịsịa, oke okpomọkụ ma ọ bụ nchekwa ezughi oke nwere ike ibute mmebi nke sel na nucleic. A maara nke ọma na ndozi anụ ahụ na paraffin na-eme nke ọma na-akpata DNA na nsogbu na-adịgide adịgide (lee onu ogugu 1 na 2). N'ụdị ndị a, ọbụnadị nke kachasị mma na ịdị ọcha agaghị enyere aka.

Ọgụgụ 1 | Mmetụta nke Idobi Ihe n'Eziokwu Dna
Agarose Gel Electrophoresis gosipụtara na ogo DNA dịpụrụ iche site na paraffin ngalaba nke Autofties dị iche iche. DNA nke ogologo iberibe nha dị iche iche dị na websaịtị dabere na usoro ndozi. Edebere DNA naanị mgbe edoziri ya na nyocha nke ala ahụ oyi na-azọchapụrụ iche. Ojiji nke ngwa ngwa acidic na-edozi ma ọ bụ nke acid-nwere nke nwere acid na-arụpụta na ọnwụ DNA dị ukwuu. Nkebi nke fọdụrụ na-emebi emebi.
N'aka ekpe, ogologo nke iberibe n'ime kilomita abụọ (KBP)

Ọgụgụ 2 | Ifufesi ike n'ezi ihe nke nucleic acid
(a) Gap 3'-5 'na -acha na strands abụọ ahụ ga-ebute ezumike na ebumnuche DNA. Synshesis nke DNA ga-eme na obere iberibe. Agbanyeghị, ọ bụrụ na saịtị na-egbu egbu na-efu na mpempe DNA, naanị nkọ dị na-eme. N'ọnọdụ dị mma, iberibe nwere ike ịlaghachi ibe ya, mana ihe ndị ahụ ga-adị obere na n'okpuru ọkwa nchọpụta.
(b) Ọnwụ dị na ntọala, tumadi n'ihi mkpọgide na thymidine syration, na-eduga na mbelata nke ọnụ ọgụgụ H-Agbụ na TM. N'oge a na-ekpo ọkụ n'oge, ndị na-eme egwuregwu ga-agbazekwa matrix DNA na agaghị enwe afọ ojuju n'ọnọdụ adịghị mma.
(c) akụkụ dị iche iche na-etolite tt.
Nsogbu ọzọ na-abụkarị na-eme na-aputa ihe na-aputa ihe na-erughị ihe na-adịchaghị mma nke ebumnuche nke ebumnuche nucleic ma e jiri ya tụnyere mmịpụta phenol-chloroform. N'ọnọdụ ndị dị oke njọ, a ga-ejikọ ya na okwu ụgha. Enwere ike ịchekwa oge dị ukwuu site na mmiri mgbaze ma ọ bụ mgbaze mgbaze nke sel, mana usoro a na-esitekwa na ndapụta Pcr acid na-ezughi oke.

Mgbochi nke ọrụ polymerase n'oge aclification

Na mkpokọta, a na-eji mgbochi dị ka akpa akpa iji kọwaa ihe niile na-eduga na subtoptimal prc. Na ezi ihe banyere ihe banyere ihe omumu, ya bu na oru nke enzyme, ya, ọ na - ebelata ma obu onye na - elekota aru site na mmekorita ya na ebe a na - aru ​​oru.
Ngwakọta dị na nlele ma ọ bụ òtù dị iche iche ma wepụ ya nwere ike ịmịpụta ihe ọ bụla (dịka Edta), si otú a na-ebute polymerase na-eduga ma ọ bụ na-eduga na-eduga ma ọ bụ na-eduga na-eduga ma ọ bụ ụgha na-eduga ma ọ bụ nke na-eduga na-eweta ma ọ bụ na-eduga na-eweta.
Agbanyeghị, ọtụtụ mmekọrịta dị n'etiti ihe mejupụtara mmeghachi omume na ebumnuche na-esiri ike dị ka 'prr gbochiri'. Ozugbo enwere ike ịhapụ iguzosi ike n'ezi ihe na nucleic acid, mmekọrịta n'etiti nlele na usoro ihe ngwọta ya na usoro siri ike ya nwere ike ime. Dịka ọmụmaatụ, 'scavengers' nwere ike iji DNA na-ejikọ ọnụ site na mmekọrịta na-enweghị ntụpọ ma na-egbochi ọnụ ọgụgụ nke ebumnuche na-emecha rute arịa mmeghachi omume pc.
Na mkpokọta, PCR gbochiri ọtụtụ mmiri na ndị na-agụ ya na-eji ọgwụ nyocha, ndị na-eme ihe nkiri, na-eri nri na gburugburu (phenols, ọla kọpa)

Enwere ike ịchọta ndị agha PCR na-egbochi ndị mmadụ na bacteria na sel eukariary na sekis, DNA - BINDICECULES nke anụ ahụ matrices anụ ahụ na akụrụngwa dị ka uwe na plastik. Ọcha nke nucleic acid n'oge ma ọ bụ mgbe mmịpụta bụ usoro kachasị amasị maka iwepu pcr n'ehihie.
Taa, akụrụngwa akpaaka dị iche iche nwere ike dochie ọtụtụ akwụkwọ ntuziaka maka akwụkwọ ntuziaka, mana 100% mgbake na / ma ọ bụ nke a na-enwebeghị ebumnuche. Ndị nwere ike na-egbochi ndị nwere ike ịnọ na nucleic acid ma ọ bụ nwee ike ịrụ ọrụ. Dị iche iche dị iche iche dị iche iche. Nhọrọ nke polymeras kwesịrị ekwesị nwere ike inwe mmetụta dị ukwuu na ọrụ na-arụ ọrụ. Ndị ọzọ na-egosi maka iji belata port mgbochi pocymerase polymerase ma ọ bụ itinye ihe mgbakwunye dịka BSA.
Enwere ike igosipụta mmeghachi omume Pcr site na iji njikwa nke dị n'ime (IPC).
A ga-eji nlezianya na azịza ndị ọzọ na ngwa ndị ọzọ na ngwa ndị mmịpụta, Edta, Etcn, SDSCN, SSTLEIC acid kewapụrụ site na nzọcha ụkwụ zuru oke. Dabere na itinye uche ha, ha nwere ike rụọ ọrụ pcr.